阻斷抗體篩選服務(wù)

什么是阻斷抗體（Blocking Antibodies）？

阻斷抗體（Blocking Antibodies），也稱為拮抗性抗體或功能性抗體，是能夠抑制特定配體–受體相互作用或信號通路的抗體。通過阻止這些相互作用，阻斷抗體有助于：

  • 理清治療靶點的作用機(jī)制（MoA）
  • 判斷候選抗體是否能中斷功能性結(jié)合事件
  • 確定抗體與靶點結(jié)合的生物學(xué)相關(guān)性
  • 評估候選抗體成為治療性拮抗劑的可能性?

阻斷實驗，如基于ELISA的阻斷、基于細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)阻斷、以及SPR/BLI競爭實驗，因而成為抗體藥物開發(fā)中從早期發(fā)現(xiàn)、先導(dǎo)篩選到功能驗證的重要工具。

阻斷抗體篩選挑戰(zhàn)

盡管阻斷抗體篩選非常關(guān)鍵，但在內(nèi)部建立這類篩選通常面臨以下困難：

  • 開發(fā)周期長：構(gòu)建穩(wěn)定、高靈敏的阻斷實驗需要數(shù)周時間優(yōu)化
  • 可重復(fù)性差：配體質(zhì)量、抗體滴定或細(xì)胞狀態(tài)的變化會導(dǎo)致結(jié)果不一致
  • 技術(shù)復(fù)雜：不同實驗體系需要各自專業(yè)知識和設(shè)備支持
  • 高資源消耗：試劑、人工及反復(fù)優(yōu)化大大增加成本
  • 缺乏經(jīng)過驗證的對照：沒有可靠的陽性抗體難以確認(rèn)實驗性能

為什么選擇締碼生物？

為了解決上述難題，締碼生物建立了全面的阻斷抗體篩選平臺，涵蓋多種經(jīng)過驗證的靶點阻斷檢測，可實現(xiàn)快速且可靠的功能性抗體評價：

  • 多種經(jīng)過驗證的阻斷實驗方法已建立
  • 支持多種分析格式:ELISA或基于細(xì)胞的流式（FC）阻斷實驗
  • 高靈敏度與可重復(fù)性：每個實驗使用表征良好的陽性對照以確保一致性
  • 支持高通量與多種樣品類型：納米抗體、兔/人/小鼠抗體、雙特異性抗體庫等

服務(wù)流程與內(nèi)容

workflow for blocking antibody screening service

案例展示

IL6R blocking ELISA assay

IL6R blocking ELISA assay

Competitive ELISA showing inhibition of IL-6R–ligand binding by a tocilizumab biosimilar. Serial antibody dilutions were incubated with IL-6R-hFc, followed by IL-6-mFc-His detection. The blocking curve yields an IC?? of 35.11 ng/mL.

IL7RA Blocking ELISA assay

Competitive ELISA showing inhibition of IL-7RA–ligand binding by a Bempikibart biosimilar. Serial antibody dilutions were incubated with IL-7RA-hFc, followed by biotinylated lL7-hFc detection. The blocking curve yields an IC?? of 25.96 ng/mL.

已開發(fā)阻斷抗體篩選方法的靶點

Target Protein Reference Antibody Method
41BBL 41BB SC113.153 ELISA
ACVR2A Activin A bimagrumab ELISA
ACVR2B Activin A bimagrumab ELISA
Canine IL31 Canine IL31RA lokivetmab ELISA
Feline IL31 Feline IL31RA dovanvetmab ELISA
CD47 SIRPα magrolimab FACS
CSF1R M-CSF cabiralizumab ELISA
DLL3 Antibody epitope competition assay tarlatamab ELISA
EGFR EGF Cetuximab ELISA
HER3 NRG1 seribantumab
patritumab		 ELISA
IL21 IL21R avizakimab ELISA
IL21R IL21 IL21R BM ELISA
Target Protein Reference Antibody Method
IL31RA IL-31 nemolizumab ELISA
IL4RA IL4 dupilumab ELISA
IL6R IL6 tocilizumab ELISA
IL7RA IL7 bempikibart ELISA
IL7RA IL7 bempikibart FACS
MET HGF emibetuzumab ELISA
OX40 OX40L KH 72577-3 FACS
PD1 PDL1 pembrolizumab ELISA
Canine PD1 Canine PDL1 INTERVET 4F12 FACS
PDL1 PD1 atezolizumab FACS
TIGIT CD155 etigilimab FACS

阻斷抗體篩選服務(wù)常見問題（FAQ）

1. 阻斷抗體篩選支持哪些類型的抗體樣本？

我們的阻斷抗體篩選服務(wù)支持多種抗體來源與格式，包括：

  • 純化抗體：IgG、Fab、VHH（Nanobody）
  • 雜交瘤上清（Hybridoma supernatant）
  • B 細(xì)胞培養(yǎng)上清
  • 腹水樣本（Ascites fluid）
  • 噬菌體展示抗體庫（如有需要，可提供抗體表達(dá)支持）

根據(jù)樣本的體積、純度及表達(dá)形式，我們將匹配最合適的ELISA或基于細(xì)胞的阻斷篩選方法，確保數(shù)據(jù)可靠性。

2. 阻斷抗體篩選需要多少樣本量？

不同樣本類型對應(yīng)的常規(guī)用量如下：

  • 純化抗體：≥50 μg（用于初篩；IC??分析階段需更多用量）
  • 抗體上清樣本：≥200μL，濃度 ≥2μg/mL
  • 腹水樣本：≥200-500μL

若樣本量受限，我們可提供小規(guī)?？贵w表達(dá)或純化服務(wù)，幫助項目順利推進(jìn)。

3. 阻斷抗體篩選通常采用哪些實驗方法？

我們根據(jù)靶點特性與應(yīng)用場景，采用以下成熟方法進(jìn)行功能性抗體篩選：

  • 基于ELISA的競爭性阻斷實驗：適用于配體-受體相互作用阻斷；高通量、數(shù)據(jù)穩(wěn)定，適合早期篩選
  • 基于流式細(xì)胞術(shù)（FACS）的阻斷實驗：在細(xì)胞表面檢測抗體阻斷效果；更貼近真實生物學(xué)環(huán)境

實驗方案會針對每個靶點進(jìn)行優(yōu)化，以確保高重復(fù)性與可比性。

4. 阻斷抗體活性是如何評估的？

阻斷活性評估通常基于以下關(guān)鍵指標(biāo)：

  • 阻斷百分比（%Blocking/%Inhibition）
  • 劑量-反應(yīng)曲線與IC??數(shù)值
  • 與已知陽性對照抗體的對比分析

此外，還可根據(jù)項目需求加入功能性讀出，如信號通路抑制、細(xì)胞功能或表型變化。

5. 初篩與IC??分析有何區(qū)別？

  • 初篩：快速篩選具有潛在阻斷活性的抗體；適用于抗體庫或大量樣本
  • IC??分析：對命中抗體進(jìn)行定量評價；判斷真實阻斷效力和開發(fā)潛力

二者結(jié)合，可對抗體的功能性阻斷能力進(jìn)行系統(tǒng)評估。

6. 阻斷抗體篩選項目周期需要多久？

標(biāo)準(zhǔn)項目周期如下：

  • 阻斷初篩：約5-10個工作日
  • IC??定量分析：約7-14個工作日
  • 基于細(xì)胞的功能實驗（可選）：額外1-2周

對于時間敏感項目，可提供加急篩選服務(wù)。

7. 阻斷抗體篩選數(shù)據(jù)報告包含哪些內(nèi)容？

標(biāo)準(zhǔn)交付的數(shù)據(jù)報告包括：

  • 初篩階段的阻斷率（%inhibition）
  • IC??分析階段的劑量-反應(yīng)曲線與IC??數(shù)值
  • 表位競爭/BLI數(shù)據(jù)（如適用）
  • 功能性實驗數(shù)據(jù)（如已開展）
  • 實驗條件、QC信息與數(shù)據(jù)說明
  • 技術(shù)總結(jié)及后續(xù)抗體開發(fā)建議

8. 是否可以進(jìn)行抗體表位競爭分析？

可以。我們可通過BLI或SPR技術(shù)進(jìn)行：

  • 配體競爭分析
  • 受體競爭分析
  • 抗體–抗體表位重疊評估

如需更精細(xì)的表位解析，也可引入突變體蛋白用于深入表位映射。

9. 阻斷抗體篩選是否需要客戶提供靶點蛋白或細(xì)胞模型？

不一定。我們可提供：多種標(biāo)簽形式的重組蛋白（多種常見靶點現(xiàn)貨可用）及已建立的穩(wěn)定或瞬時表達(dá)細(xì)胞系。客戶也可提供自有抗原或細(xì)胞模型，用于定制化阻斷篩選方案。

10. 阻斷抗體篩選服務(wù)是否支持NDA保密協(xié)議？

支持。所有樣本、實驗流程與數(shù)據(jù)均在簽署保密協(xié)議（NDA）后嚴(yán)格保密，確?？蛻繇椖堪踩?。